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一、项目进展情况及取得成果
项目进展情况:按计划进行
主要研究阶段(起止时间) 研究内容 完成情况
2018.10-2019.03单体化合物的分离完成
项目研究成果(已取得的成果)
序号 项目成果名称 成果形式
 
二、项目季度报告

本项目已顺利进行了研究工作计划的前两部分,即利用OSMAC策略深入发掘海洋源真菌T.longibrachiatum TDW2的次级代谢能力、发酵代谢产物的QS抑制活性筛选及化学分析以及从具有QS抑制活性的次级代谢产物中分离纯化活性单体化合物并进行结构鉴定具体开展情况如下:

1)菌株活化:

保藏于-80℃的菌株接种于含有3.3%氯化钠的PDA培养基上进行复苏。

2)OSMAC策略获得多种粗提物浸膏:

本项目经过调研文献,选用了真菌2号、真菌3号、真菌5号、豆粉、甘油、寡营养、Peter、PYG、PDA、大米共10种培养基进行海洋源真菌TDW2的小发酵培养,发酵结束后,用等量的乙酸乙酯对发酵液进行萃取3遍,合并后真空浓缩得各培养条件下的粗提物浸膏,称重,甲醇溶解配制25mg/ml的溶液,0.22um滤膜过滤后,备用。

3)TLC及HPLC分析:

对以上获得的粗提物浸膏进行化学分析,分别通过TLC及HPLC指纹图谱方法检测各培养条件下次级代谢产物的种类及含量,从中分析获得3种较优的发酵条件。

4)菌株TDW2的规模化发酵:

采用选择的大米培养基进行菌株TDW2的规模化发酵,以每三角瓶80g大米/120ml去离子水为标准配制大米培养基,共发酵50瓶。高压灭菌后,接入菌株TDW2进行静置发酵,温度25℃,培养35天。培养结束后,先用甲醇进行浸提3次,浓缩获得的水溶液再采用乙酸乙酯萃取3次,减压浓缩获得总提取物浸膏。

5)大米发酵提取物的分离与结构鉴定:

从大米发酵提取物中分离获得利用各种柱层析、高效液相色谱和薄层层析等手段和活性追踪的方法从大米发酵提取物中分离纯化真菌代谢产物,得到单体化合物,然后利用质谱(MS),核磁共振波谱(1H-NMR,13C-NMR)及其他波谱手段测定活性化合物结构为4-羟基苯乙醇和环(酪氨酸-脯氨酸)。

 
三、经费使用明细情况
项目获批总经费(元) 已使用项目研究经费(元) 已报销金额(元) 未报销金额(元)
20000 0 0 0
项目经费开支情况
名目 用途 金额(元) 备注
论文版面费
专利申请费
调研、差旅费
打印、复印费
资料费
试剂等耗材费
元器件、软硬件测试、小型硬件购置费
其它
 
四、项目后期具体工作计划

1、单体化合物的QS抑制活性评价。

2、采用分子对接方法模拟化合物与受体蛋白的相互作用,初步探讨其分子作用机制。
 
五、指导教师意见

该项目自实施后,小组成员积极投入到项目的实施计划中,按照项目原定研究工作计划顺利进行,目前通过OSMAC策略获得3种较优的菌株发酵培养条件,并采用大米培养基进行了大量发酵,得到粗提物。对粗提物进行单体化合物分离,并鉴定了2个单体化合物,为下一步的研究工作实施奠定了基础。

 
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